हम पीसीआर प्रयोग भी कर रहे हैं, परिणाम हमेशा दूसरों की तुलना में इतने खराब क्यों होते हैं?

हम पीसीआर प्रयोग भी कर रहे हैं, परिणाम हमेशा दूसरों की तुलना में इतने खराब क्यों होते हैं?

प्रयोगशाला में, अन्य लोगों के पीसीआर को देखें, प्रवर्धन दक्षता अधिक है, वैद्युतकणसंचलन पट्टी एकदम सही है, और स्वयं को देखें, लंबे समय तक करना कठिन है, प्रतिक्रिया बहुत अच्छी है, एक गलत सकारात्मक परीक्षण का परिणाम …… क्या है समस्या?

मेरा मानना ​​है कि हमारे कई भागीदारों को भी विभिन्न समस्याओं का सामना करना पड़ा है। जब हम पीसीआर प्रयोगों में एक दीवार में दौड़ते हैं, तो हम अवचेतन रूप से प्रतिक्रिया प्रणाली के कारकों का विश्लेषण करेंगे, लेकिन हम अक्सर प्रयोगों में उपभोग्य सामग्रियों के महत्वपूर्ण प्रभाव की उपेक्षा करते हैं।

आपका पीसीआर परिणाम गलत है, पीसीआर उपभोग्य वस्तुएँ आवश्यक कारण हो सकती हैं। एक ओर, उपभोग्य सामग्रियों का सूक्ष्म संदूषण या अवरोधकों की शुरूआत से प्रायोगिक प्रदूषण होगा; दूसरी ओर, उपभोग्य सामग्रियों का अनुचित चयन भी प्रयोगात्मक परिणामों को प्रभावित करेगा।

समस्या फिर आती है। पीसीआर उपभोग्य सामग्रियों के कई प्रकार हैं, तो प्रयोग को और अधिक सुगम बनाने के लिए सही का चयन कैसे करें? किन समस्याओं पर ध्यान देना चाहिए? चिंता मत करो, आजI कई वर्षों के अनुभव के साथ, पीसीआर उपभोग्य सामग्रियों के चयन की आम समस्याओं को सुलझाना, मुझे आपकी मदद करने की उम्मीद है।

 

Q1: पीसीआर उपभोग्य वस्तुएं आमतौर पर पीपी सामग्री से क्यों बनी होती हैं?

हुइडा: क्योंकि पीसीआर आपूर्ति आमतौर पर अभिकर्मकों या नमूनों के सीधे संपर्क में होती है, पॉलीप्रोपाइलीन (पीपी) सामग्री जैविक रूप से निष्क्रिय होती है, जैव-आणविक का पालन नहीं करती है, और अच्छी रासायनिक सहिष्णुता और तापमान सहिष्णुता है (121 पर ऑटोक्लैप किया जा सकता है) ° सी, थर्मल चक्र के दौरान तापमान परिवर्तन का भी सामना कर सकता है)।

 

Q2: मुझे पीसीआर ट्यूबों/प्लेटों के विभिन्न आकारों के बीच कैसे चयन करना चाहिए?

हुडा: चयन का उद्देश्य: विशिष्ट प्रयोगात्मक आवश्यकताओं के अनुसार सही उत्पादों का चयन करें। पीसीआर ट्यूब के अधिकांश आकार पीसीआर प्रतिक्रिया की आवश्यकताओं को पूरा कर सकते हैं। इस आधार पर, पहले कम मात्रा वाली ट्यूब चुनने की सिफारिश की जाती है। चूंकि कम मात्रा प्रतिक्रिया ट्यूब / प्लेट में एक छोटा ओवरहेड स्थान होता है, गर्मी चालकता में सुधार होता है और वाष्पीकरण कम हो जाता है। साथ ही, बहुत अधिक या बहुत कम नमूने जोड़ने से बचना आवश्यक है। बहुत अधिक तापीय चालकता, स्पिलेज और क्रॉस-संदूषण को कम कर सकता है, जबकि बहुत कम होने से नमूना वाष्पीकरण हानि हो सकती है।

सामान्य प्रतिक्रिया ट्यूबों के विनिर्देश और मात्रा:

एकल / संयुक्त ट्यूब: 0.5 मिली, 0.2 मिली, 0.15 मिली

96-वेल प्लेट: 0.2 मिली, 0.15 मिली

३८४-वेल प्लेट: ०.०४एमएल

 

Q3: जब नमूना मात्रा छोटी होती है, तो मैं सिंगल पाइप या संयुक्त पाइप चुनूंगा, लेकिन कुछ में फ्लैट कवर और कुछ में उत्तल कवर क्यों होता है?

Huida: जब नमूना मात्रा छोटी होती है, तो एकल ट्यूब या संयुक्त ट्यूब को प्राथमिकता दी जाएगी। हालांकि, जब प्रतिक्रिया की मात्रा बड़ी होती है, तो एकल ट्यूब प्रमुख होती है, और मात्रा 0.5 एमएल तक पहुंच सकती है। और फ्लैट कवर और उत्तल कवर प्रत्येक का फायदा है, विशिष्ट निम्नलिखित जानकारी का उल्लेख कर सकते हैं।

सिंगल ट्यूब: 0.2 मिली और 0.5 मिली; लचीले ढंग से नमूना मात्रा चुन सकते हैं।

कनेक्टिंग ट्यूब: 0.2ml या 0.15ml वैकल्पिक है; 8 या 12 ट्यूब आम हैं।

फ्लैट कवर: क्यूपीसीआर के लिए सटीक फ्लोरेसेंस सिग्नल ट्रांसमिशन प्रदान कर सकता है; अंक लिखना आसान।

उत्तल कवर: दबाव के कारण प्रतिक्रिया ट्यूब के विरूपण को कम करने के लिए पीसीआर उपकरण के गर्म कवर के साथ संपर्क करें; हालाँकि, यह प्रतिदीप्ति संकेत संचरण को प्रभावित करेगा और इसे qPCR प्रयोग पर लागू नहीं किया जा सकता है।

 

Q4: कुछ PCR प्लेटों में स्कर्ट क्यों होती हैं और कुछ में नहीं?

हुइडा: वास्तव में, पीसीआर प्लेट की स्कर्ट को स्वचालन अनुप्रयोगों के लिए बेहतर अनुकूलन के लिए डिज़ाइन किया गया है, जो उपकरण के लिए स्थिर समर्थन और यांत्रिक सहनशक्ति प्रदान करता है, साथ ही साथ पाइपिंग प्रक्रिया के दौरान उच्च स्थिरता प्रदान करता है।

पीसीआर प्लेट्स को आम तौर पर नॉन-हेमलाइन, हाफ-हेमलाइन और फुल-हेमलाइन में विभाजित किया जाता है।

के बग़ैर प्लेट: अधिकांश पीसीआर मशीनों या क्यूपीसीआर मशीनों के लिए उपयुक्त है, लेकिन स्वचालन अनुप्रयोगों के लिए नहीं। पिपेटिंग की प्रक्रिया में स्थिरता अधिक नहीं होती है, इसलिए इसे प्लेट समर्थन के साथ उपयोग करने की आवश्यकता होती है।

हाफ स्कर्ट एज प्लेट: लेबल या बार कोड एप्लिकेशन, और स्वचालित एप्लिकेशन के लिए अनुकूलित किया जा सकता है, और इसमें अच्छी पाइपिंग स्थिरता है।

पूर्ण स्कर्ट एज प्लेट: स्वचालित प्रयोगात्मक अनुप्रयोगों के लिए बहुत उपयुक्त, बार कोड के लेबल और अनुप्रयोग के लिए भी अनुकूलित किया जा सकता है। इसमें अच्छी यांत्रिक शक्ति है, इसका उपयोग उभार मॉड्यूल पीसीआर उपकरण में किया जा सकता है, और पाइपिंग की प्रक्रिया में उच्च स्थिरता है।

 

प्रश्न5 :पीसीआर प्लेटों के लिए, कोने और लेबल एक जैसे क्यों नहीं होते हैं?

हुइदा: यह कोने काटने और अंकन के प्रभाव पर निर्भर करता है।

कॉर्नर कटिंग: पीसीआर प्लेट की कॉर्नर कटिंग पोजिशन का चुनाव आसान पोजिशनिंग के लिए उपयुक्त इंस्ट्रूमेंट की आवश्यकताओं पर निर्भर करता है।

पहचान: पीसीआर प्लेटों पर अल्फ़ान्यूमेरिक मार्कर व्यक्तिगत कुओं और नमूना स्थानों की पहचान करने में मदद करते हैं। आम तौर पर उभरा हुआ रंग डिजिटल लोगो या उत्कीर्ण लोगो के लिए। कुछ स्वचालित अनुप्रयोगों के लिए, मुद्रित और चिह्नित प्रतिक्रिया प्लेटों को बेहतर ढंग से सील किया जाता है।

 

Q6: कुछ पीसीआर प्लेट उत्तल क्यों होती हैं जबकि अन्य सपाट होती हैं? कौन सा बहतर है?

हुइदा: जो फिट बैठता है वह सबसे अच्छा है। सामान्य पीसीआर प्लेट दो प्रकार की होती हैं: फ्लैट पोर मार्जिन और हाई पोयर मार्जिन।

अधिकांश पीसीआर उपकरण के लिए उपयुक्त फ्लैट होल मार्जिन रिएक्शन प्लेट।

बढ़ते छिद्र किनारों के साथ रिएक्शन प्लेट्स झिल्ली सीलिंग की सुविधा प्रदान करते हैं और नमूनों के बीच क्रॉस-संदूषण के जोखिम को कम करते हैं।

 

Huida को PCR उत्पादों और उद्योग के उच्च मानकों के उत्पादन और प्रसंस्करण में कई वर्षों का अनुभव है। उत्पाद लाइन समृद्ध है और पीसीआर प्रयोगात्मक अनुप्रयोगों के विशाल बहुमत को पूरा कर सकती है। आओ और अपने प्रयोगात्मक अनुप्रयोगों के लिए सही उत्पाद चुनें।

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पोस्ट करने का समय: जून-03-2021